1、技術原理
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最近幾年新出現的一種基因組編輯工具，它能夠完成RNA導向的DNA識別及編輯。與ZFN和TALEN技術相比，CRISPR/Cas9技術更易于操作，具有更強的可擴展性。CRISPR技術使用一段序列特 異性向導RNA分子（sequence-specific guide RNA，sgRNA）引導高度保守的CRISPR相關基因（Crispr- associated gene, Cas gene, Cas9）編碼的核酸內切酶，到靶位點處對DNA序列進行特異性的切割，并引入單個或多個堿基的插入或缺失突變，從而完成基因組的編輯。目前，CRISPR/Cas9系統的高效基因組編輯功能已被應用于多種模式生物，包括擬南芥、煙草、水稻等植物、人、小鼠、斑馬魚、秀麗隱桿線蟲及細菌。
2、技術優勢
1)使用AtU6啟動子，廣泛適用于擬南芥、煙草等對雙子葉植物。
2)對靶基因實現精準編輯，引起DNA的插入缺失和替換。
3)載體構建簡單，周期短，使用方便，而且成本較低。
3、應用領域
1)廣泛應用于基因的功能和調控研究，也可以加快動植物新品種的培育。
2)利用其打靶精確而高效的優勢，可將其應用于人類基因治療、新藥開發等生物醫學研究領域，針對目前人類所高發的重大疾病(例如癌癥、傳染病、遺傳病以及自體免疫性疾病等)開辟新的治療途徑，并且為臨床上的個性化治療提供方便。
4、技術路線及時間周期
5、實施方案
（1）靶序列分析、合成及CRISPR/Cas9載體構建
詳細操作參照第四個實驗中CRISPR/Cas9載體構建中的操作。
（2）煙草遺傳轉化
詳細操作參照第五個實驗基因轉化-過表達/RNAi中的操作。
6、服務分項內容 周期 驗收標準
gRNA設計合成 5個工作日 分析報告
植物CRISPR/Cas9載體構建 10個工作日 測序報告
煙草遺傳轉化 2-3個月 植株DNA PCR擴增目的基因電泳圖特異條帶
煉苗移栽（可選） 15個工作日 -
收獲T1代種子（可選） 加速生長周期 -
靶基因擴增測序 5個工作日 測序報告
